1565 में उन्होंने अपने चचेरे भाई हेनरी, लॉर्ड डार्न्ले से शादी कर ली, जिससे एलिज़ाबेथ को काफी निराशा हुई (डार्न्ले मार्गरेट ट्यूडर के पोते थे और इस प्रकार अंग्रेजी सिंहासन पर भी उनका दावा था)।
एलिज़ाबेथ काफी खुश थी कि हेनरी उसकी प्रतियोगिता थी।