

Принцип методу. Альдолаза розщеплює фруктозо-1,6-дифосфат, продукти розщеплення якого утворюють з 2,4-дінітрофенілгідразіном в лужному середовищі з'єднання, забарвлене в малиною колір. Фруктозо-1,6-дифосфат інкубується в буферному розчині з досліджуваної пробою і гідразінсульфатом для зв'язування утворюються фосфотріоз. Білки осідають трихлороцтової кислотою і в фільтраті фотометрически визначається забарвлене похідне фосфотріоз. Інтенсивність забарвлення пропорційна активності альдолази.
Хід роботи. У центрифужную пробірку помістити 0,5 мл досліджуваної сироватки крові, 0,5 мл 0,5% розчину NaHCO3, 0,12 мл гідразінсульфата, 0,12 мл 0,002 М розчину монойодуксусной кислоти, 0,12 мл дистильованої води і 0,12 мл розчину фруктозо-1,6-дісфосфата. Суміш в пробірці перемешеть і помістити в термостат на 1 годину при 38 ° С. Після цього в пробірку додати 1,5 мл 10% розчину трихлороцтової кислоти і вміст пробірки відцентрифуговувати 10 хв при 3000 об / хв. Супернатант 0,5 мл перенести в чисту пробірку, додати в неї 0,5 мл 3% розчину NаОН і залишити на 10 хв при кімнатній температурі. Після цього додати 0,5 мл 0,1% розчину 2,4-дінітрофенілгідразіна і поставити в термостат при 38 ° С. Після закінчення 10 хв до вмісту пробірки додати 3,5 мл 3% розчину NаОН і колоріметріровать на ФЕК в кюветі товщиною 5 мм з зеленим світлофільтром проти води.
Розрахунок.Активність альдолази сироватки крові висловлюють в умовних одиницях екстинкції, помножених на 100.
В нормі активність альдолази в сироватці крові становить 3-13 одиниць і вище.
Клініко-діагностичне значення.Активність альдолази в сироватці крові збільшується при інфекційному гепатиті, токсичних ураженнях печінки і деяких інших захворюваннях.
Рекомендовані теми реферативних повідомлень | Заняття № 1. Біохімія крові. Білки плазми крові. Гемостаз. | Методичні вказівки до самопідготовки | Приклади контролю вихідного рівня знань | Робота № 1. Кількісне визначення білірубіну в сироватці крові за методом Іендрашека. | Робота № 2. Визначення лужного резерву крові титрометричним методом | Еталони відповідей на ситуаційні задачі | Заняття № 2. Біохімія печінки. Механізми знешкодження токсичних речовин. | Методичні вказівки до самопідготовки | Приклади контролю вихідного рівня знань |