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Keywords: Mastitis, subclinical, etiology, bovine

RESUMO

Com o objetivo de verificar a ocorrência da mastite subclínica e identificar seus agentes etiológicos foram coletadas 122 amostras dos quartos mamários de 31 vacas do rebanho de uma queijaria em Nossa Senhora do Livramento, MT. Submeteram-se as amostras ao teste de Whiteside e destas as positivas foram analisadas por exames microbiológicos. 74,2% (23/31) das vacas demonstraram-se portadoras de mastite subclínica a um nível de infecção de 44,3% (54/122) dos quartos. Os Staphylococcus foram os patógenos mais incidentes (45,4%), sendo identificados como S. intermedius (41,4%), S. aureus (17,2%), S. warneri (6,9%), S. carnosus (3,4%). As cepas que não tiveram sua identificação confirmada permaneceram como Staphylococcus coagulase negativa (27,6%) e Staphylococcus coa-gulase positiva (3,4%). Isolou-se ainda coliformes (15,6%), Candida kefyr (7,8%), Torulopsis glabrata (7,8%), Micrococcus sp. (4,7%), Sarcina sp. (3,1%) e outros microrganismos (15,6%). A espécie S. intermedius foi a mais predominante dentre todos os agentes etiológicos encontrados, correspondendo a 18,4% dos isolamentos. Presumiu-se que a mastite ocorreu em um elevado percentual pela não adoção de medidas de controle e prevenção.

Palavras-chave -Mastite, subclínica, etiologia, bovinos.

SUMMARY

Intending to check the occurrence of the subclinical mastitis and to identify its causative agents, were collected 122 quarter samples of 31 cows from the herd of a small cheese industry placed in the city of Nossa Senhora do Livramento, MT. The samples were submitted to the Whiteside test and among these, the positive ones were analyzed in microbiological exams. 23 (74,2%) cows were carrying subclinical mastitis and the infected quarters percentage was 44,3% (54/122). The Staphylococcus were the most predominant pathogens (45,4%), and were identified as S. intermedius (41,4%), S. aureus (17,2%), S. warneri (6,9%), S. carnosus (3,4%). The strains that didn´t have their identification confirmed remained as Coagulase Negative Staphylococcus (27,6%) and Coagulase Positive Staphylococcus (3,4%). Also were isolated coliforms (15,6%), Candida kefyr (7,8%), Torulopsis glabrata (7,8%), Micrococcus sp. (4,7%), Sarcina sp.(3,1%), and other microorganisms (15,6%). The S. intermedius was the most predominant among all the etiological agents found, corresponding to 18,4% of the isolations. It was supposed that mastitis occurred in a high percentile because of the absence of prevention and control strategies.

Rodrigo Prado Martins ✉

Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária -UFMT.

Márcia Regina Haddad Marques

Instituto de Biociências -UFMT.

Adelino Cunha Neto Faculdade de Ciências Médicas -UFMT.

✉dinoad@hotmail.com INTRODUÇÃO mastite, definida como inflamação da glândula mamária, representa o maior desafio à exploração leiteira por se tratar de uma enfermidade de caráter multifatorial e de grande impacto econômico. Estima-se que no Brasil em função de sua alta prevalência, possam ocorrer perdas de produção entre 12 e 15% e ainda perdas econômicas significativas para as indústrias de laticínios devido a baixa qualidade do leite (Santos, 2001).

São resultados dos processos mastíticos o aumento da contagem de células somáticas (CCS) e alterações dos componentes individuais do leite. Como conseqüência destas alterações diversos efeitos podem ser observados na produção de derivados lácteos, destacando-se a diminuição do valor nutritivo, menor rendimento industrial, redução do tempo de prateleira e depreciação da qualidade organoléptica (Fernandes, 2003;Kirk, 2003). Além disso, no queijo produzido com leite apresentando elevada CCS, nota-se também aumento do conteúdo de água e baixa taxa de enrijecimento do coágulo, defeitos de textura, elevada perda de sólidos no soro e aumento do tempo para formação do coágulo (Santos, 2001) De acordo com Corrêa & Corrêa (1992), as mastites podem se manifestar na forma clínica, latente e subclínica. A última é de maior importância por ocorrer 15 a 40 vezes mais que a forma clínica, além de ter longa duração e ser de difícil detecção. Tais fatores contribuem para que seus portadores se tornem reservatórios de microrganismos para o rebanho (Sá et al., 2000). Baseando-se nos achados de pesqui-sadores em diversos países como Bulgária (Tsonev et al., 1975), Estados Unidos (Philpot & Nickerson, 1991) Guyana, Colômbia, Jamaica (Brown et al., 1998), Etiópia (Workineh et al., 2002) e Tanzânia (Mdegela et al., 2004), pode-se inferir que a mastite subclínica possui grande relevância em rebanhos de todo mundo. Em uma revisão de relatos nos estados brasileiros de maior produção leiteira, Mendonça et al. (1999) verificaram que o percentual de ocorrência desse tipo de infecção variou entre 44,8 e 97%.

Devido à ausência de alterações macroscópicas no úbere ou no leite, a forma subclínica da mastite é detectável principalmente por testes aplicados ao leite para a demonstração dos produtos da inflamação, provas microbiológicas e mudanças na sua composição química. São exemplos destes testes o California Mastitis Test (CMT), Wisconsin Mastitis Test e o teste de Whiteside (Schalm et al., 1971).

Os processos mastíticos geralmente iniciam como resultado da penetração de microrganismos, 137 diferentes segundo Watts (1988), pelo ducto do teto até o interior da glândula mamária.

Dentre estes microrganismos, os Staphylococcus são citados como os principais patógenos associados à mastite subclínica no Brasil, seguidos dos Streptococcus e do Corynebacterium bovis (Barbalho & Mota, 2001;Mendonça et al., 1999;Pardo et al., 1999). Demonstrou-se ainda o envolvimento dos coliformes embora esses sejam responsáveis por menos de 1% dos casos (Costa, 1998).

O Staphylococcus aureus tem sido a espécie mais freqüentemente isolada, reportando-se também o envolvimento de outros Staphylococcus coagulase positiva (SCP) nessas infecções (Sá et al., 2000;Roberson et al., 1996;Langoni et al., 1991). Existem, ainda, relatos que sugerem um aumento na significância dos Staphylococcus coagulase negativa (SCN) como causadores de mastite (Haas & Smola, 2002;Nicolau et al., 1992). Os maiores aumentos na CCS foram atribuídos às afecções causadas por SCN, sendo estes capazes de provocar reduções da quantidade de leite secretado pelos quartos afetados mesmo que em menor escala quando comparados aos SCP (Zafalon et al.,1999).

Pela sua ampla distribuição nos rebanhos leiteiros, os Staphylococcus representam um risco eminente aos consumidores de produtos lácteos graças ao seu elevado potencial de produção de enterotoxinas resistentes aos tratamentos térmicos comumente aplicados ao leite. Estudos evidenciaram que a produção de enterotoxinas não está restrita ao S. aureus. Outros SCP e os SCN demonstraram-se capazes de produzir toxinas em condições laboratoriais (Fagundes & Oliveira, 2004;Becker et al., 2001).

Embora a maioria dos casos de mastite seja de origem bacteriana, esporadicamente podem ser isolados destes, outros agentes como os fungos, identificados em 1 a 12% dessas afecções. O predomínio maior é das formas leveduriformes e, em especial, do gênero Candida. Esses microrganismos são encontrados em inúmeras fontes como equipamentos de ordenha, fezes, infusões intramamárias, alimentos e até mesmo na pele do úbere e tetos (Krukowski & Saba, 2003).

Portanto, a mastite desempenha um importante papel em saúde pública, dado o potencial de transmissão dos organismos de sua etiologia e toxinas ao homem. Mesmo com o advento da pasteurização, a transmissão de patógenos via leite e seus derivados representa um risco durante as falhas neste processo e principalmente, no nicho de mercado de produtos lácteos não pasteurizados (Bradley, 2002). No Brasil, 44% do leite consumido é proveniente do mercado informal, ou seja, é comer-cializado sem qualquer tratamento térmico ou controle laboratorial (Fagundes & Oliveira, 2004).

Além disso, as principais causas do uso de antimicrobianos em pecuária leiteira são o controle e o tratamento das mastites. O uso indiscriminado desses medicamentos tem contribuído para o aumento da resistência dos patógenos e isso não representa um risco somente à saúde animal. Há a possibilidade de que os antimicrobianos utilizados em animais de produção possam selecionar cepas resistentes de microrganismos que podem ser transmitidas ao ser humano pela ingestão de produtos de origem animal (White & McDermott, 2001). Outra conseqüência é a presença de resíduos de antibióticos no leite, o que pode ocasionar uma série de problemas ao consumidor como a ocorrência de reações de hipersensibilidade e possível choque anafilático em indivíduos mais sensíveis, caracterizando outro relevante risco à saúde pública (Nascimento et al., 2001) Vista a importância do controle e prevenção das infecções intramamárias na melhoria da qualidade dos produtos oferecidos à população, objetivou-se neste estudo verificar a ocorrência da mastite subclínica no rebanho de uma queijaria em Nossa Senhora do Livramento, e identificar seus agentes etiológicos, dada a importância do conhecimento destes na formulação de estratégias de profilaxia e tratamento adequadas.

MATERIAIS E MÉTODOS

Foi estudado o rebanho leiteiro de uma propriedade produtora de queijo minas frescal situada no município de Nossa Senhora do Livramento, a 51 Km de Cuiabá, MT. Utilizou-se 31 vacas primíparas e pluríparas, de diferentes raças e idades em estágios de lactação diferenciados. A ordenha era praticada duas vezes ao dia, manualmente, com bezerro ao pé.

Coletaram-se 122 amostras dos quartos mamários após o processo de lavagem, secagem com papel toalha e anti-sepsia do úbere e tetos com álcool a 70% realizado antes da ordenha. As amostras foram acondicionadas em frascos do tipo penicilina previamente esterilizados e posteriormente transportadas em uma caixa de material isotérmico (isopor) com gelo ao Laboratório de Microbiologia do Departamento de Ciências Básicas em Saúde da Faculdade de Ciências Médicas -UFMT, em Cuiabá.

Todas as amostras foram submetidas ao teste de Whiteside de acordo com a metodologia preconizada por Schalm et al. (1971), sendo as positivas semeadas em alíquotas de 0,1 ml em agar Manitol Salgado, agar Eosina Azul de Metileno e incubadas em aerobiose a 37ºC por 24/48 horas. A mesma quantidade foi semeada em agar Batata Dextrose à temperatura ambiente por 96 horas. As cepas provenientes das amostras que apresentaram crescimento nos referidos meios de cultura foram coradas pelo método de Gram e submetidas ao exame morfológico.

Para a identificação dos Staphylococcus utilizou-se o modelo proposto por Behme et al. (1996) a partir dos resultados das cepas crescidas em agar Manitol às seguintes provas: catalase; oxidação e fermentação da glicose; coagulase; DNAse; Termonuclease; produção de acetoína; acidificação de lactose, mani-tol, e sacarose; resistência a novobiocina e nitrofurantoína.

Identificou-se presuntivamente os coliformes a partir da prova da oxidase realizada com as cepas crescidas em agar Eosina Azul de Metileno e do aspecto cultural em agar McConkey. Para a identificação das leveduras as cepas crescidas em agar Batata Dextrose foram semeadas em agar farinha de milho Tween 80 a fim de verificar o aparecimento de blastoconídeos e testadas quanto à assimilação dos carboidratos lactose, sacarose, glicose e maltose. Utilizou-se a tabela de identificação de Fisher & Cook ( 2001) As bactérias do gênero Staphylococcus são causadoras de mastite contagiosa. Esta se caracteriza pela transferência dos agentes etiológicos de uma glândula mamária infectada para outra sadia por meio de equipamentos de ordenha contaminados, pelo bezerro ao mamar ou pelas mãos dos ordenhadores (Mendonça et al., 1999). Como a propriedade abordada não realizava nenhuma medida de desinfecção dos tetos antes ou após ordenha e pouca atenção era desprendida à higiene das mãos do ordenhador, pode-se atribuir a esses fatos a elevada ocorrência de Staphylococcus no rebanho. Das 29 cepas isoladas, 20 foram identificadas em nível de espécie, permanecendo 09 (08 SCN e 01 SCP) em nível de genérico (Tabela 3).

RESULTADOS E DISCUSSÃO
A espécie mais isolada foi o S. intermedius tanto em relação aos outros Staphylococcus (41,4%), quanto aos demais agentes causadores de mastite (18,8% PESQUISAS agente como patógeno da glândula mamária. Dentre as bactérias isoladas de cães sadios e doentes, o S. intermedius é a espécie predominante ocorrendo ainda em outras espécies carnívoras, cavalos e pássaros. Levando em conta as evidências da transmissão zoonótica deste agente do animal para o homem e o seu potencial enterotoxigênico (Becker et al., 2001), deve ser presumida a participação desta espécie em casos de intoxicação estafilocócica via ingestão de alimentos contaminados.

O S. aureus destaca-se como o microrganismo causador de mastite de maior ocorrência mundial (Bradley, 2002;Brown et al., 1998;Watts, 1988). Esse patógeno possui uma elevada resistência a antimicrobianos e a capacidade de produzir uma ou mais enterotoxinas é encontrada em 30 a 50% de suas cepas (Fagundes & Oliveira, 2004). Embora não tenha sido o principal agente causal de infecções intramamárias neste estudo, identificou-se como esse patógeno 17,2% das cepas de Staphylococcus e 7,8% de todos os isolamentos, confirmando a tendência de se encontrar essa espécie em casos de mastite.

As espécies S. carnosus e S. warneri foram isoladas por Jarp (1991) em 3,4 e 0,7% respectivamente dos casos de mastite. O S. warneri foi a espécie mais freqüentemente isolada por Haas & Smola (2002) dentre os SCN causadores de infecções intramamárias subclínicas, ocorrendo ainda em relatos de mastite caprina (Siqueira et al., 2000) e bubalina (Guido et al., 2001).

Os coliformes foram encontrados em 15,6% das amostras. Um valor semelhante (14,1%) foi relatado por Dego & Tareke (2003) e percentuais menores foram observados por Costa (1998) em Minas Gerais (0,7%) e São Paulo (0,4%). Em propriedades norte-americanas o National Mastitis Council constatou a participação dos coliformes em 1,3% dos quartos com mastite (Jones & Swisher, 1998). Essas bactérias são patógenos ambientais cuja principal fonte são as fezes. Segundo Cerqueira & Sena (1998), a infecção da glândula mamária por coliformes pode ocorrer facilmente se os tetos estiverem contaminados após a ordenha.

Na referida propriedade, além da não realização do pré e pós-dipping, as ordenhas ocorriam em um ambiente inadequado (curral de chão batido) no qual a coleta das fezes não era feita diariamente e não se adotava nenhuma estratégia de manejo que mantivesse as vacas em pé após a ordenha. Portanto, esses fatos podem justificar a ocorrência de mastites por coliformes no rebanho analisado.

Encontraram-se ainda leveduras em 15,6% dos quartos afetados, estando esse percentual acima do descrito por Krukowski & Saba (2003) e Pardo et al (1999). Desse total as espécies Candida kefyr e Torulopsis glabrata foram identificadas a um mesmo percentual de 7,8%. Lagneau et al. (1996) isolaram a C. kefyr em amostras de quartos com mastite e a T. glabrata em amostras de quartos não inflamados. Ambas foram encontradas por K´ossowska & Malinowski (2001) em amostras de leite do tanque de 66 propriedades na Polônia e de quartos inflamados.

Dentre os fungos leveduriformes causadores de mastite, Krukowski et al. (2000) identificaram como C. kefyr a espécie mais incidente nessas infecções. A C. glabrata foi a levedura encontrada com maior freqüência por Elad et al (1998) em amostras de fezes de bezerro e de acordo com Luo & Samaranayake (2002), destaca-se como um patógeno emergente responsável por 15% das candidíases superficiais e sistêmicas em humanos.

Estudando um foco de mastite clínica e subclínica em bovinos cau-sada por Candida sp., Mota et al. (1999) constataram a participação do homem como fonte de infecção dentro da cadeia epidemiológica de transmissão deste agente durante a ordenha manual. Visto que a propriedade por nós abordada também praticava a ordenha manual e não adotava as medidas higiênicas adequadas durante esta, não pode ser descartada a possibilidade de contaminação das fêmeas portadoras de mastite por leveduras pelo contato com o ser humano.

Os principais fatores que determinam a rentabilidade de uma propriedade leiteira são a menor ocorrência de mastite e a qualidade do leite (Cerqueira & Sena, 1998). A aceitabilidade do consumidor está diretamente ligada à qualidade e, portanto, a oferta de um produto dentro dos padrões de sanidade terá um papel importante na expansão do mercado de produtos lácteos.

Um plano baseado na adoção de cinco medidas de controle denominado "Five Point Plain" é citado por Bradley (2002) como o principal responsável pelo controle bem sucedido da mastite contagiosa, redução maciça da contagem de células somáticas e da incidência de mastite clínica e subclínica em propriedades do Reino Unido. Tal plano envolve o uso da desinfecção do teto após a ordenha (pósdipping), adoção da terapia da vaca seca em todo o rebanho, rápida identificação e tratamento das mastites clínicas, descarte das vacas cronicamente afetadas e manutenção regular do equipamento de ordenha.

Baseando-se no sucesso do Five Point Plain em países desenvolvidos, Brown et al. (1998) estudaram o impacto desse plano em propriedades leiteiras da Bolívia por um período de seis anos. O resultado verificado foi uma queda de 62% na média anual da contamarço -2006 PESQUISAS gem de células somáticas das amostras do tanque das propriedades, o que indicou um decréscimo considerável na prevalência da mastite. Tal fato pôde ser notado tanto em rebanhos ordenhados mecanicamente quanto manualmente.

Esse resultado indica a eficácia do Five Point Plain no controle da mastite em países tropicais em desenvolvimento, podendo essas medidas ser aplicadas de maneira bem sucedida também no Brasil.

CONCLUSÕES

A mastite subclínica foi constatada em 74,2% das vacas analisadas a um nível de infecção de 44,3% dos quartos mamários. Atribui-se esses elevados percentuais a não adoção de medidas de controle e prevenção dessa enfermidade.

Os Staphylococcus foram os principais causadores de mastite subclínica, sendo responsáveis por 45,4% dos casos, com o predomínio dos SCP.

O S. intermedius foi a espécie isolada com maior freqüência dentre os Staphylococcus e outros agentes causais encontrados.

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REFERÊNCIAS

  Foi diagnosticada a mastite subclínica em 23 (74,2%) das 31 vacas, perfazendo um total de 54 (44,3%) quartos mamários positivos ao teste de Whiteside dos 122 que foram analisados (Tabela 1).Esses achados estão de acordo com o verificado por Costa (1998) nos estados de Minas Gerais e São Paulo (72%), e são superiores ao relatado porHarrop et al (1975) no estado de Pernambuco (39%),Nicolau et al., (1992) na região de Monte Alto, SP (38,3%) e Vianni et al. (1992) no Rio de Janeiro (40,4%). O nível de infecção dos quartos mamários foi superior aos 12% citados por Philpot & Nickerson (1991), semelhante ao verificado por Pardo et al. (1999) (43,0%) e inferior ao citado por Dego & Tareke (2003) (60,8%). Em oposição ao argumento de que o esgotamento do úbere pelo Tabela 1 -Prevalência de mastite subclínica no rebanho de uma queijaria em Nossa Senhora do Livramento, MT. março -2006 PESQUISAS bezerro poderia baixar o nível de infecções intramamárias, Costa et al. (1998) constataram uma maior taxa de animais com mastite e um maior nível de infecção dos quartos em rebanhos ordenhados com bezerro ao pé quando comparados a rebanhos sem a participação dos bezerros. Logo, é possível que o elevado percentual de mastite no rebanho em questão possa ser justificado não somente pela falta de medidas de controle e prevenção dessa enfermidade como também pela adoção dessa prática de manejo. Após as provas microbiológicas, foram isoladas das 54 amostras de quartos mamários com mastite sub-clínica 64 cepas. Os microrganismos isolados e identificados estão descritos na Tabela 2. Os Staphylococcus, responsáveis por 45,4% dos casos, foram os principais causadores de mastite subclínica, corroborando com os achados de Pardo et al. (1999) e Grasso et al. (1998) em rebanhos brasileiros, e Dego & Tareke (2003) e Workineh et al. (2002) em rebanhos africanos cujas condições se assemelham às do rebanho abordado. Desse total, 28,2% revelaram-se coagulase positiva e 17,2% coagulase negativa, evidenciando uma maior participação dos SCP na etiologia dessa enfermidade. O mesmo foi concluído por Barbalho & Mota (2001) e Nicolau et al. (1992), a um percentual de 20,16 e 25,79 para os SCP e 18,60 e 14,68 para os SCN respectivamente. Tais dados contrariam constatado por Haas & Smola (2002), cujo estudo demonstrou uma maior prevalência dos SCN.

Tabela 2 -

 2 Microrganismos causadores de mastite subclínica no rebanho de uma Tabela 3 -Staphylococcus identificados como causadores de mastite subclínica no %1 -em relação às cepas de Staphylococcus %2 -em relação a todos os microrganismos isolados 108 Higiene Alimentar -Vol. 20nº 139 março -2006

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